Hormone de croissance : test de drogues

La réalisation un test de drogues sur recombinant somatotropin l'hormone (STG) de la personne a été considérée pendant plusieurs années comme une tâche impraticable. Cependant récemment on a montré qu'au moins deux approches indépendantes permettent d'établir recombinant appliqué de l'athlète STG ou non. Les méthodes d'analyse développées subissent l'essai maintenant et il sera possible d'espérer être appliqué comme le test antidopage officiel déjà dans le proche avenir.

Le problème principal consiste en ce qu'à la différence d'erythropoietin n'importe laquelle des méthodes offertes ne permet pas de définir STG dans l'urine. Il est provoqué tout d'abord par la concentration extrêmement basse d'hormone dans l'urine qui ne permettent pas de le trouver par les méthodes existantes. En plus l'allocation de somatotropin avec l'urine représente le processus difficile qui est caractérisé par la variabilité considérable et reste mal étudié toujours (Saugy et autres, 1996). La méthode IEF appliquée en cas d'ERO dans les analyses d'urine est inappropriée pour l'analyse de STG puisque le dernier n'a aucun site Internet glycosylation. Selon les données modernes, les molécules STG d'une origine recombinant sont complètement identiques presque à la fraction principale de molécules STG, hypophysis et toutes différences physiques et chimiques entre eux ne sont pas révélées.

Néanmoins, même en dépit du manque des sites Internet de glycosylation, STG dans le sang le système circulatoire il est fourni par le mélange d'isoforms moléculaires (Baumann, 1999). La recherche de ces isoforms a progressé pas autant qu'en cas de gonadotrophin, cependant pour les années dernières est devenu possible à identifier quelques composantes principales. Avec l'isoform principale ayant le poids moléculaire 22 kd et se composant de 191 balance de conservation d'acide aminé dans le sang le deuxième pour la représentation quantitative est trouvé, l'isoform plus courte avec un poids moléculaire de 20 kd dans lequel l'ordre ne sont là aucun acide aminé 32 — 46 (Hashimoto et autres, 1998 ; Tsushima et autres, 1999 ; Leung et autres, 2002). Il y a aussi encore plus de formes courtes STG, cependant ils sont découverts changeamment et ne sont pas analysés complètement encore. Certains d'entre eux représentent des produits d'hydrolyse ou une dégradation de molécules STG. Les isoforms STG peuvent exister dans la forme de monomers, variateur et multimer se composant de l'identique (gomodimer) ou des isoforms (heterodimeasure) différentes.

Dans beaucoup d'impact de cas de STG sur un corps humain négocie le facteur qui a reçu le nom l'insuline comme le facteur de croissance de moi (IFR-1) produit principalement dans un foie et aussi localement dans l'os cartilagineux et beaucoup d'autres tissus, IFR-1 dans le sang le système circulatoire où il contacte les protéines liantes spécifiques (Le Roith ct al., 2001). La plus grande valeur d'eux la protéine 3 (IGFBP-3) et aussi et subjedinitsa labile (ALS) acide quels produits sont aussi sous contrôle STG a IFR. Au moins, pour IGFBP-3 on montre que cette protéine peut avoir le propre impact sans tenir compte de la liaison avec IFR-1 et peut être considérée donc comme l'hormone peptide indépendante. Ensemble IFR-1, IGFBP-3 et ALS créent un complexe triple qui a la plus grande espérance de vie, en comparaison avec les molécules le créant séparément. N'oubliez pas prennent Hepatamin pour de meilleurs résultats.

Une de la stratégie de recherche de l'épreuve convenable pour la détection d'application de STG comme un stimulator s'est composée à l'évaluation de changements quantitatifs de produits d'impact dynamique pharm de STG, dans l'augmentation possible particulière de la quantité de composantes du complexe triple excédant la gamme de variabilité naturelle au niveau (Dali et autres, 2000). Un d'avantages d'une telle épreuve se composerait que l'âge de produits d'impact dynamique pharm de STG excède l'âge de l'hormone qui permet d'augmenter une période pendant laquelle il y a une possibilité de détection d'abus d'hormone somatotropny. Le consortium scientifique international a réalisé une série à grande échelle une recherche, les produits d'impact dynamique pharm de STG dirigé vers l'étude de commande selon les facteurs différents, en incluant des activités physiques pointues et chroniques, un âge, un sexe, une origine ethnique et des blessures (Wallace ct al., t999, 2000 ; Longobardi ct al., 2000 ; Ehmborg ct al., 2003). La confirmation du fait d'induction des changements dans la structure d'impact dynamique pharm arrivant en cas de la longue application régulière de STG et ayant les caractéristiques permettant de distinguer eux des changements incités par les occupations de formation ou d'autre stimulators est devenue l'accomplissement principal des recherches conduites. En particulier, la commande de description de modèle statistique d'un certain nombre de produits d'impact dynamique pharm d'hormone et de considération des distinctions sexuelles a été créée. Aussi le fait qui pendant la détermination de l'évaluation de facteurs déterminants des méthodes pour l'analyse immunisée utilisée a été fait à cette fin et pour chacun d'entre eux est important les gammes spécifiques de sensibilité ont été établies. Pas toutes les méthodes commerciales disponibles satisfont les besoins établis pendant les recherches qui provoquent le besoin de réalisation la sélection prudente de systèmes de l'analyse immunisée qui sont censés être utilisés plus loin. En plus que le modèle statistique très difficile est la base pour cette méthode pour l'essai, il est nécessaire d'imaginer des limites de variabilité de résultats des techniques utilisées et garantir l'utilisation fixée dans les épreuves d'anticorps identiques. Il peut représenter un problème puisque beaucoup de types d'analyse immunisée sont basés sur l'utilisation le policlon maintenant, mais pas monoclonal les anticorps. Cependant les anticorps de policlon ne peuvent pas être reçus dans de grands nombres et après la résiliation d'une fournée il est impossible de garantir que la fournée suivante sera identique au premier. Tout cela permet de comprendre pourquoi les organisations antidoping internationales paient ainsi l'attention considérable au développement de technologies de reçu d'anticorps monoclonal, convenables pour l'utilisation. Après avoir affiné de tous les détails méthodiques, cette méthode pour l'essai peut être très efficace mais à la comparaison avec l'analyse de sang s'est appliqué à un test de drogues sur ERO.

Encore une approche est dirigée vers l'analyse directement de STG. Dans la différence d'une gamme d'isoforms d'hormone, hypophysis, recombinant l'hormone est toujours fourni par la forme unique avec un poids moléculaire de 22 kd. Aussi la production d'une forme de recombinant avec un poids moléculaire de 20 kg est décrite, mais jusqu'à présent cette protéine a été utilisée seulement dans plusieurs essai clinique. Recombinant somatropin, s'est appliqué au traitement de déficit d'hormone de croissance aux enfants, les adolescents et les personnes d'âge adulte, a le poids moléculaire 22 kg, il est évident que les mêmes médecines utilisent comme stimulators dans le sport. Une telle homogénéité ou "un manque d'hétérogénéité" aux formes de recombinant d'hormone le distinguant d'une variété naturelle des isoforms STG hypophysis, font aussi une base pour le soi-disant "metol de l'analyse immunisée différentielle" s'est appliqué à un test de drogues sur recombinant STG (Z. Wu et autres, 1999) : l'introduction dans un organisme de recombinant monomeric STG avec un poids moléculaire de 22 kg mène pour augmenter dans le contenu relatif de cette isoform dans le sang. Ce changement dans une gamme d'isoforms d'hormone devient de plus encore plus visible en cas de la longue application de STG quand le fait d'allumer du mécanisme de règlement de retour négatif dans cette situation mène pour diminuer dans la sécrétion d'hormone endogène hypophysis (Wallace et autres, 2001a). La projection des anticorps monoclonal reçus en utilisant des médecines différentes de STG endogène de la personne a permis de développer deux versions de l'immunoanalysis. Dans la première option les anticorps immobilisés raccordent l'isoform d'hormone de croissance principalement de 22 kg et dans le deuxième est principalement somatropin "une origine hypophysial", fourni différent, mais à la grandeur par les isoforms (Bidlingmaier et autres, 2000). L'analyse d'échantillons de sérum au moyen des deux versions de l'analyse immunisée permet de déterminer le contenu relatif d'une isoform d'hormone avec un poids moléculaire de 22 kg, mais à la comparaison avec les autres ("STG total") et grâce à cela pour révéler que les échantillons avec l'anormalement haut contenu de 22 g de STG.It ont été confirmés que les changements dans une gamme d'isoforms d'hormone de croissance sont provoqués seulement par l'application de recombinant STG pendant qu'à la stimulation de sécrétion après que l'augmentation d'activité physique de la quantité de toutes les formes d'hormone est observée (Wallace et autres, 2001b). En plus, la sensibilité d'une méthode initiale a été de façon significative augmentée (Bidlingmaicr et autres, 2003). L'ego est devenu possible grâce à la réception de nouveaux anticorps monoclonal. Avec cela le complexe des épreuves de confirmation indépendantes qui sont aussi basées sur l'application des nouveaux anticorps monoclonal ayant l'affinité à epitopa différencié a été développé. Le dernier est une condition indispensable de l'acceptabilité de l'analyse immunisée pour la réalisation un test de drogues : chaque type de l'analyse doit être confirmé avec d'autre analyse dirigée vers une alternative epitop de nasmolecule intéressant qui permettra d'obtenir les données supplémentaires nécessaires pour l'identification d'une molécule.

Les traits d'une méthode pour l'analyse immunisée différentielle limitent son application seulement à la direction des tests antidopage il ne permet pas de distinguer la gamme naturelle des isoforms STG et les médecines d'hormone extraite de hypophysis des gens morts sur la structure. En plus par suite de la période de demi-vie extrêmement courte de STG dans le sang système circulatoire (environ 15 minutes) la possibilité de détection d'utilisation d'hormone de croissance comme un stimulator reste limitée 24 — 36 heures. Il est évident que même le développement de méthodes plus sensibles ne permettra pas de surmonter cette restriction puisque l'on a montré qu'après la désintégration de protéine recombinant et la résiliation de la réponse négative de système de réaction, hypophysis commence de nouveau la gamme ordinaire d'isoforms d'hormone. D'autre part, le fait qui pour l'accomplissement de l'hormone d'influence stimulante a besoin d'être accepté la probabilité d'augmentations quotidienne d'identification de l'athlète appliquant le dope pendant les épreuves imprévues qui ne sont pas raccordées avec la participation dans les compétitions.

L'application d'une méthode pour l'analyse immunisée différentielle demande aussi la justification sans condition de compétence des types utilisés de l'analyse immunisée. En plus comme le calcul d'un rapport est réalisé, il est nécessaire de définir précisément le niveau de reproductibilité de résultats de méthodes séparées et de la relation tenant compte de l'influence potentielle de variabilité de résultats sur la grandeur du rapport compté. La diminution essentielle dans la variabilité de résultats peut accomplir si utiliser la même petite plaque titrante avec les anticorps immobilisés pour les deux analyses : une moitié d'une plaque est couverte avec les anticorps monoclonal pour l'isoform STG avec un poids moléculaire de 22 kd et d'autre moitié — monoclonal les anticorps pour l'hormone totale de hauteur humaine. Après l'adjonction de calibrators, kontroly c'est aussi le modèle à chaque moitié d'une plaque, tout ñå est couvert avec le même découvrant monoclonal les anticorps. Un tel ordre de réalisation l'analyse immunisée permet de réduire de façon significative la variabilité qui surviendra sûrement lors de la distribution inégale de matière d'un échantillon entre deux plaques différentes (Bidlingmaicr et autres, 2000).